白芨培养基的制作方法

1.白芨培养基的制作方法

1、PDA培养基

马铃薯250克，葡萄糖25克，硫酸镁0.5克，维生素B110毫克，琼脂20克，水1000毫升。

将马铃薯洗净去皮（已发芽的要挖掉芽眼），称取250克切成薄片，置于铝锅中加水煮沸30分钟，用4层纱布过滤取汁，用水补足1000毫升；再称取琼脂20克，用剪刀剪碎后加入马铃薯汁液内，继续加热，并搅拌，使琼脂全部溶化；加入葡萄糖，稍煮几分钟后，用2层纱布过滤，调节酸碱度为pH5.6；趁热分装入试管内，装量为试管长度的2/5，管口塞上棉塞，立放于试管笼上。分装时，应注意不要使培养基粘在试管口和管壁上，以免发生杂菌感染。

2、PSA培养基

马铃薯200克，蔗糖20克，磷酸二氢钾3克，琼脂20克，水1000毫升。

制作方法与培养基配方之一相似，只是在加入葡萄糖更换为蔗糖，同时加入磷酸二氢钾，煮沸融化后过滤取汁，趁热装入试管中，塞好棉塞，直立放于试管笼上。

2.最先创用固体培养基的科学家是

科赫，伟大的德国医学家。诺贝尔医学和生理学奖获得者。生于1843年，1866年毕业于德国哥廷根大学医学院。1910年5月27日，离开了人世。

科赫创立的微生物学方法一直沿用至今，为微生物学作为生命科学中一门重要的独立分支学科奠定了坚实的基础。科赫首创的显微摄影留下的照片在今天也是高水平的。这些技术包括分离和纯培养技术、培养基技术、染色技术等。

3.培养基的配制方法

1、配制用水

培养基的大部分是水，所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准，水的电阻应为200万欧姆，一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的

双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。

2、培养基

培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至7.2-7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。

3、血清

培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。

4、抗菌素

为防止培养时期细菌的污染，可在培养基中添加适当抗菌素，一般用量与组织细胞培养相同：卡那霉素100单位/毫升，或双抗--青霉素100单位/毫升，链霉素100微克/毫升。

5、植物血凝素（PHA）

非增殖期的细胞不能制备染色体，如人外周血淋巴细胞，但在离体培养过程中，在PHA的作用下，可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。

经实验测定其分裂高峰分别于培养后44-48小时和68-72小时。

PHA有粘多糖，蛋白质两种重要成分。粘多糖促使有丝分裂，蛋白质起凝集作用。PHA激活的细胞数随其浓度而增加，直至全部免疫活性细胞均

被激活为止，但PHA浓度过高会引起凝集，一般采用4%浓度为好。

4.微生物培养基的制备

1、购买琼脂条或琼脂粉，琼脂粉价格比较昂贵；

2、配置肉汤培养基；

3、加入琼脂，加入的量为百分之二，为了省钱，可以加百分之一点五，就是每100毫升培养基中加入1、5克的琼脂粉或琼脂条；

4、放入灭菌锅中进行灭菌。如果不灭菌，需要放在电炉上进行加热，如果配制用的是玻璃容器则加热时需要垫石棉网，以防止加热过程中破裂；

5、灭菌完成后，冷却就成固体了。

关键词： 白芨 培养基 制作方法