培养基的定义

(1)培养基的定义

培养基是使用适于细菌生长繁殖需要的各种营养物质，人工配制而成的基质。培养基按营养成分和用途不同，分为基础培养基、增菌培养基、选择培养基、鉴别培养基和厌氧培养基。按培养基物理形态分为固体、半固体和液体培养基三类。根据不同的细菌种类和培养目的，应采用不同种类的培养基。

(2)WPM培养基和MS培养基的区别

区别：

1、MS培养基：无机盐和离子浓度较高，是较稳定的平衡溶液，其养分数量和比例较合适，可满足植物的营养和生理需要，其硝酸钾含量较高，可用于植物器官、花药、细胞和原生质体培养；

2、WPM培养基：一种低浓度培养基，适合于多种木本植物的培养。

(3)培养基的配制方法

1、配制用水

培养基的大部分是水，所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准，水的电阻应为200万欧姆，一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的

双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。

2、培养基

培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至7.2-7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。

3、血清

培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。

4、抗菌素

为防止培养时期细菌的污染，可在培养基中添加适当抗菌素，一般用量与组织细胞培养相同：卡那霉素100单位/毫升，或双抗--青霉素100单位/毫升，链霉素100微克/毫升。

5、植物血凝素（PHA）

非增殖期的细胞不能制备染色体，如人外周血淋巴细胞，但在离体培养过程中，在PHA的作用下，可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。

经实验测定其分裂高峰分别于培养后44-48小时和68-72小时。

PHA有粘多糖，蛋白质两种重要成分。粘多糖促使有丝分裂，蛋白质起凝集作用。PHA激活的细胞数随其浓度而增加，直至全部免疫活性细胞均

被激活为止，但PHA浓度过高会引起凝集，一般采用4%浓度为好。

(4)培养基的灭菌流程

培养基的灭菌流程如下：

1、使用前在外层锅内加入适量的水，水量与三角搁架相平；

2、将内锅放在三角搁架上，培养基分装完毕后将待灭菌的物品放在内锅里，将盖上的排气软管插到内锅的排气槽内，然后将锅四周的固定螺旋以两两对称的方式旋紧，打开排气阀；

3、加热井的同时打开排气阀，待锅内沸腾并有大量蒸汽自排气阀冒出时，维持5分钟以上，然后将排气阀关闭；

4、当压力升至0.1兆帕，温度达到121摄氏度时，维持20到30分钟后，隔断热源；

5、出锅当压力表降至零处后，打开排气阀，旋开固定螺旋，开盖，取出灭菌物；

6、灭菌完毕取出物品后，将锅内余水倒出，保持内壁及搁架干燥，盖好锅盖即可。

(5)肉汤琼脂培养基的制作过程和原理

肉汤培养基是常用的液体培养基，也是制备常用的细菌分离培养基及其他某些培养基的基础。

材料：牛肉、蛋白胨、氯化钠、水（蒸馏水或自来水）、比色管、蒸馏水、10%碳酸氢钠、10%醋酸、0.02%酚红指示剂、吸管等。

制作过程：

1、取新鲜瘦牛肉，除去脂肪及筋膜，切成小块后并用绞肉机绞碎，每500g碎牛肉加水1000ml，混合后置4℃冰箱过夜。

2、次日取出煮沸半小时左右，使肉渣全部凝固，加热过程中不时地用玻璃棒搅拌，以免沉底，也可以不放置冰箱过夜，直接煮沸1小时。

3、用纱布过滤，弃去肉渣（肉渣中的液体应尽量挤净），于滤液中加入1%蛋白胨及0.5%氯化钠，加热溶解，并补足失水至1000 ml 。

4、冷至50℃左右，用精密pH试纸测酸碱度，用校正pH为7.6左右；过碱时，可用10%醋酸校正之。

5、分装于试管中或三角烧瓶中，15磅(121℃)高压蒸气灭菌20～30min，备用。

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